جداسازی، تشخیص و تعیین گروه های آناستوموزی - دانلود رایگان
دانلود رایگان ریزوکتونیا از جمله قارچ های بازیدیومیست خاکزی استکه در بیشتر خاکها بصورت غیر یکنواخت وجود دارد. جمعیت این قارچ در خاک پایین است لذا جداسازی آن از خاک مشکل
دانلود رایگان
| جداسازی، تشخیص و تعیین گروه های آناستوموزی ریزوکتونیا از خاک مزارع، خزانه ها، منابع کودی و خاک های مخلوط در شهرستان شیرازچکیده ریزوکتونیا از جمله قارچ های بازیدیومیست خاکزی استکه در بیشتر خاکها بصورت غیر یکنواخت وجود دارد. جمعیت این قارچ در خاک پایین است لذا جداسازی آن از خاک مشکل است. گونهی Rhizoctonia solani با گروه آناستوموزی AG-2 و AG-4 مهمترین بیمارگر گیاهان زینتی در شیراز است اما منبع آلودگی گیاهان زینتی به این قارچ کاملا مشخص نیست. در طی سالهای 1392 و 1393 از خزانههای گلها و گیاهان زینتی قصرالدشت، کفترک، داریون، باجگاه، پارکها، بلوارها و میدانهای شهرستان و دامنهی کوهها در منطقهی باجگاه نمونهبرداری انجام شد. نمونهها شامل خاکهای زراعی و غیر زراعی، کودهای حیوانی، برگی و کارخانهای، خاکهای مخلوط و آمیختههای خاکی شامل کوکوپیت و ورمیکمپوست بودند. روش جداسازی از خاک و محیط کشت آن بهینهسازی شد، به این صورت که نمونههای خاک از الک دو میلیمتری عبور داده و به مدت یک شبانهروز در دمای اتاق هواخشک شدند. 40 گرم از هر نمونهی خاک مرطوب شد، که بطور متوسط رطوبت آن، 20 درصد برآورد شد.20 گرم آن درون ظرفهای یکبار مصرف کاسهای دربدار ریخته و 60 عدد بذر چغندرقند که به مدت 30 دقیقه روی هیتر جوشانده شده بود به عنوان طعمه، روی آن چیده و توری نایلونی با سوراخهایی با اندازهی کمتر از یک میلیمتر طوری قرار داده شد که مقداری از توری از لبههای ظرف بیرون باشد. بقیهی 20 گرم خاک روی توری ریخته و درب آن بسته شد. ظروف به مدت 72 ساعت در انکوباتور 25 درجه سانتیگراد نگهداری و بذور پس از شستشو و ضدعفونی سطحی با مایع سفیدکنندهی تجاری ده درصد روی محیط کشت PDA حاوی 100 پیپیام PCNB، 100 پیپیام کلرامفنیکل و 50 پیپیام Hymexazole کشت شدند. 218 جدایهی ریزوکتونیا از نمونهها بدست آمد و پس از شمارش تعداد هسته در هر سلول و تعیین قطر ریسه، 193 جدایه چندهستهای و 25 جدایه دوهستهای بودند. گروه آناستوموزی 50 جدایهی چندهستهای به روش باندونی و با داشتن 18 گروه آناستوموزی استاندارد تعیین شد. دوازده گروه آناستوموزی شامل AG-1-1A، AG-2، AG-2-2، AG-2-2C، AG-2-2IIIB، AG-3، AG-4، AG-5، AG-7، AG-11، AG-13 و AG-BI شناسایی شدند. ویژگیهای مورفولوژیکی شامل شکل و رنگ پرگنه، شکل، رنگ و چگونگی تشکیل اسکلروت در محیط کشت و دمای بهینهی رشد تعیین شد. اثبات بیماریزایی جدایهها روی گیاهان چغندرقند، گندم و نخود در شرایط گلخانه بررسی و تعداد گیاهان مرده شمارش شد. همهی گروههای آناستوموزی مایهزنی شده به نخود، روی این گیاه، بیماریزا بودند و همچنین AG-2، AG-2-2، AG-2-2C، AG-2-2IIIB، AG-4، AG-7 و AG-11 روی گیاه چغندرقند بیماریزا بودند. در هر دو گیاه، بیشترین درصد گیاهان مرده، در اثر مایهزنی AG-2-2 بود. علائمی روی گیاه گندم مشاهده نشد. درصد فراوانی گروههای آناستوموزی R.solani در خاک شهرستان تعیین شد، به این صورت که AG-4 (36%)، AG-2 (18%)، AG-1-1A (18%)، AG-2-2IIIB (6%)، AG-3 (4%)، AG-2-2 (4%)، AG-13 (4%)، AG-2-2C (2%)، AG-5 (2%)، AG-7 (2%)، AG-11 (2%) در خاکهای زراعی و AG-BI (2%) در خاک بکر بودند منابع کودی، خاکهای مخلوط و آمیختههای خاکی عاری از عامل بیماری بودند و منبع آلودگی، نشاءهای خزانههای گلها و گیاهان زینتی تعیین شد. کلمات کلیدی: جداسازی، محیط کشت، R. solani، گروههای آناستوموزی فهرست مطالب عنوان صفحه R. solaniاز برخی گیاهان در دنیا............................................................................................................ 14 عنوان صفحه عنوان صفحه Rhizoctonia solani 38 عنوان صفحه Rhizoctonia solani......................................................................................... 54 فهرست جدول ها عنوان صفحه Rhizoctonia solaniاز برخی گیاهان در دنیا.............................................................................. 14 Rhizoctonia solani از برخی گیاهان در ایران................................................................... 16 Rhizoctonia solani....................................................................................................................... 54 Rhizoctonia solaniبه گیاهان چغندرقند و نخود.............................. 60 فهرست نمودارها عنوان صفحه Rhizoctonia solani جداسازی شده از نقاط مختلف شهرستان شیراز.......................................................................... 59 Rhizoctonia solani در گیاه چغندرقند.................................................. 61 Rhizoctonia solaniدر گیاه نخود........................................................... 61 فهرست شکل ها عنوان صفحه عنوان صفحه عنوان صفحه عنوان صفحه فصل اول مقدمه etal., 1996).میزبان آن سبزیها و گلها، تعدادی گیاه زراعی، انواع چمنها، گیاهان زینتی چندساله، درختچهها و درختان است. معمولیترین نشانههای بیماریهای ریزوکتونیایی به صورت مرگگیاهچه در داننهالها، پوسیدگی ریشه و ساقه، شانکر ساقه و پوسیدگی اندامهای ذخیرهای است.(Agrios, 2005) این قارچ در ایران از روی 104 میزبان گزارش شده است (ارشاد، 1388). et al., 1992). et al., 1991). بسیاری از عوامل محیطی در بقاء آن اثر دارد که از آن جمله میتوان به بافت خاک، پتانسیل آب، دما، تغذیهی خاک وگیاه و عوامل میکروبی خاک اشاره کرد. بقاء در خاک مرطوب بیشتر از خاک خشک است (Sneh et al., 1995). دمای بهینهی بیشتر گروههای آناستوموزی[9] این قارچ برای ایجاد عفونت حدود 15 تا 18 درجهی سانتیگراد است. ولی بعضی از گروهها در دمای بالاتر حتی 35 درجهی سانتیگراد بیشترین فعالیت را دارند (Agrios, 2005). Ceratobasidium و شکل جنسی اعضا چندهستهای به دو گونهی Waitea circinata و Thanatephorus cucumeris تعلق دارد (Andersen and Stalpers, 1994). شرایط محیطی خاصی برای تشکیل فرم جنسی این قارچ نیاز است که هنوز بطور کامل شناخته نشده است. رطوبت 100- 90 درصد، دمای حداقل 18-14 و حداکثر 26-23 درجهی سانتیگراد برای تشکیل بازیدیوم و بازیدیوسپور نیاز است. از نظر نیاز نوری، برخلاف فرم غیرجنسی که برای تولید حجم زیاد ریسه نیاز به گذراندن شب دارند، برای تشکیل لایهی هیمنیوم به نور در روز و برای بالغشدن بازیدیوم و تشکیل بازیدیوسپور نیاز به شدت نورهای خاصی دارند. فرم جنسی روی بسترههای مختلفی از جمله ماسههای درشت کف رودخانه، خاکهای لومی قرمزقهوهای، خاکهای لومیرسی، بافتهای گیاهی شامل سیبزمینی، پنبه و چغندرقند و همچنین عصارهی خاک به همراه آگار تشکیل میشود (Sneh et al., 1991). Rhizoctonia solani با AG-2و AG-4 به عنوان مهمترین بیمارگر گیاهان زینتی در شهرستان شیراز معرفی شد.روشهای پیشنهاد شده برای جداسازی این قارچ از خاک، گاهی اوقات با شکست مواجه شده و با توجه به مشکلاتی که این روشها داشتهاند، نیاز به انجام آزمونهای جدید احساس میشود. خاک و مواد آلی میتوانند منبعی برای آلودگی گیاهان زینتی به قارچ ریزوکتونیا باشند به همین دلیل پس از بدست آوردن یک روش ثابت برای جداسازی ریزوکتونیا از خاک، با هدف پیدا کردن منبع آلودگی، جداسازی از انواع خاک زراعی و غیر زراعی، خاک خزانههای گلهای زینتی قصرالدشت و منابع کودی انجام شد. برای تعیین تنوع و پراکنش ریزوکتونیا در نقاط مختلف شهرستان شیراز به تعیین گروههای آناستوموزی و مشخصات مورفولوژیکی جدایهها پرداخته شد و در نهایت برای تعیین بیماریزا بودن جدایههای بدست آمده، اصول کخ اجرا شد. 1-بهینهسازی روش جداسازیریزوکتونیا از خاک و منابع کودی 2-جداسازي ریزوکتونیا از خاك، مواد آلی و کود و تعیین میزان پراکنش گروههای آناستوموزی ریزوکتونیا در خاک مزارع، خزانهها و منابع کودی 3-بررسی خزانهها و مناطق پخش کود از نظر آلودگی به گروههای آناستوموزی R. solani در شهرستان شیراز 4-تعیین مشخصات مورفولوژیکی گروههای آناستوموزی R. solani 5-اثبات بیماریزایی برخی از جدایههای گروههای مختلف آناستوموزی روی برخی از گیاهان از جمله چغندرقند، نخود و گندم در شرایط گلخانه دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |